Идеей проекта является разработка рекомбинантной технологии экспрессирующих векторов хламидий из штаммов Chlamydophila pecorum и Chlamydophila psittaci, которая будет применена в производстве диагностической иммуноферментной тест-системы, соответствующей международным стандартам GMP. Что будет способствовать точной диагностике хламидиоза сельскохозяйственных животных, и последующем улучшении эпизоотологической ситуации по данному заболеванию на территории РК и стран Центральной Азии, за счет обеспечения ветеринарных лабораторий высокочувствительной и специфичной тест-системой, обладающей диагностической ценностью по отношению к распространенным на территории РК и стран Центральной Азии штаммам хламидий сельскохозяйственных животных. А также применения современных методов математического моделирования, применяемых для совершенствования технологий производства биопрепаратов.
План реализации проекта на 2022 год :
Задача 1. Отработка технологии получения экспрессирующих векторов хламидий;
Задача 1.1 Подготовка чистых культур хламидий для ПЦР-анализа
Штаммы Chlamydophila pecorum и Chlamydophila psittaci полученные из международного музея культур ATCC®, будут накоплены и подготовлены для обратной трансляции в последовательность ДНК, разделением ее на небольшие кусочки, оптимизацией и генерированием перекрывающихся олигонуклеотидов.
Задача 1.2 Получение специфических фрагментов Pmps (Polymorphic Membrane Proteins - полиморфные мембранные белки)
Сборка хламидийного гена с 4 концевым сайтом рестрикции генов Pmps проводится в условиях de novo полимеразной цепной реакции с использованием высокоточной Phusion ДНК полимеразы, производителя ThermoFisher scientific, США.
Задачач 1.3 Конструирование экспрессирующих векторов на основе фрагментов Pmps для создания рекомбинантного штамма B. subtilis.
Библиотеку генов Pmps создается на основе экспрессионного вектора pET28, содержащий T7 промотор, ген устойчивости к канамицину, гистидиновую последовательность, производителя Promega, США. Полученные клоны секвенируются.
Задача 1.4 Отработка режимов глубинного культивирования рекомбинантного штамма B. subtilis в биореакторе
Исследование различных режимов глубинного культивирования рекомбинантного штамма B. subtilis в биореакторе будет основано на изучении степени накопления бактериальной массы, с применением ручной и автоматической регулировки температуры, pH, растворенного кислорода (DO), с мешалкой и барбататором, а также при различных температурах от 15±1оС до 39±1оС, при уровне растворенного кислорода от 15-80%, с применением различных лимитирующих субстратов и питательных сред.
Задача 1.5 Отработка методов и режимов концентрирования и очистки рекомбинантных антигенов
Применение проточных центрифуг для концентрирования, с внедрением разных видов градаций позволит получить концентрированные рекомбинантные антигены. Очистка рекомбинантных антигенов будет проводиться с помощью металл-хелат аффинной хроматографии на сорбенте IMAC 6 FF. колонка диаметром 50 мм высотой 200 мм будет уравновешиваться буферным раствором IMAC A со скоростью 25 мл/мин. Детекция будет осуществляться при длине волны 280 нм, начиная с оптической плотности 30 mAU собирая целевую фракцию.
Руководитель проекта:
Ахметсадыков Нурлан Нуролдинович - Генеральный директор ТОО «Научно-производственное предприятие «Антиген». Доктор ветеринарных наук, Профессор Казахского Национального Аграрного Исследовательского университета. https://orcid.org/0000-0001-6076-7164. Scopus Author ID - 55622396700. Web of Science ResearcherID AAX-9017-2020.
Исполнители:
Крыкбаев Еркин Алийбекович - ветеринарный врач по специальности «Ветеринарная медицина». Магистр техники и технологии по специальности «Пищевая безопасность». PhD докторант по специальности «Ветеринарная медицина» Казахского Национального Аграрного Исследовательского университета. https://orcid.org/0000-0002-4473-1513.
Турсынбаев Нуртас Сабитжанулы - ветеринарный врач по специальности «Ветеринарная медицина». Магистр ветеринарных наук по специальности «Ветеринарная медицина», PhD докторант по специальности «Ветеринарная медицина». https://orcid.org/0000-0001-9474-987X.